獼猴桃花粉萌發(fā)動態(tài)及培養(yǎng)基成分對花粉萌發(fā)的影響a
作者：姚春潮，張朝紅，劉旭鋒，龍周俠 (西北農(nóng)林科技大學(xué)園藝學(xué)院楊凌 712100)
近年，因授粉蜜蜂和昆蟲數(shù)量明顯不足，使獼猴桃依靠天然授粉很難優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)，故生產(chǎn)中須采用人工輔助授粉。對獼猴桃人工輔助授粉的采粉期、花粉萌發(fā)和儲藏條件的研究已有報道，但未見有關(guān)花粉萌發(fā)動態(tài)及Ca(NO3)2(硝酸鈣)、NagM07O24 (仲鉬酸鈉)、MnSO4(硫酸錳)、NaCl(氯化鈉)等因子對獼猴桃花粉影響的報道。為此，進行了本研究，以期為人工輔助授粉和雜交育種提供依據(jù)。
▲四川東紅獼猴桃
1 材料與方法
1.1材料
供試材料為本校獼猴桃種質(zhì)資源圃4個美味獼猴桃雄性株系：幫增一號、秦雄201、35-19N1、35-18N1。5月初于大蕾期采摘中心雄花，用鑷子摘下花藥，置于培養(yǎng)室干凈紙上避光干燥4小時左右。待花藥充分裂開后收集花粉，裝入干燥的小瓶中并密封，將小瓶放入盛有干燥劑的密閉容器中，再放置冰箱中冷藏備用。
▲恒溫震蕩氣育培養(yǎng)箱檢測獼猴桃花粉活性
1.2 方法
1.2.1花粉生活力和萌發(fā)力測定采用離體培養(yǎng)和TTC染色兩種方法?；ǚ叟囵B(yǎng)以10%蔗糖、 HzBO?(硼酸)150mg/L、1%瓊脂為基本培養(yǎng)基， pH值6.4~6.8，溫度25℃左右，在凹玻片上用滴管滴上配好的培養(yǎng)基，然后用頭發(fā)絲條播花粉，播好后放入鋪有加濕濾紙的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。
1.2.2 花粉萌發(fā)動態(tài)觀察采用“1.2.1”的培養(yǎng)基培養(yǎng)，每0.5小時觀察一次，觀察后不再培養(yǎng)，直至
3.5小時。
▲testing pollen
1.2.3 培養(yǎng)基不同成分對花粉萌發(fā)的影響在“1.2.1”的培養(yǎng)基中HzBO?濃度設(shè)為0、50、100、150、200mg/L；在“1.2.1”的培養(yǎng)基中分別加入 Na6M07O2 、Ca(NOз)2或MnSO↓,NaMo7O2 濃度分別設(shè)0、20、40、60、80mg/L，Ca(NO3)2濃度設(shè)0、5、10、50、100 mg/L，MnSO4濃度設(shè)0、50、100、150、200 mg/L。
1.2.4 NaCl對花粉萌發(fā)的影響在“1.2.1”的培養(yǎng)基中加入NaCl，設(shè)0、50、100、200、300及500 mg/L等6個濃度處理。
以上試驗除TTC染色是重復(fù)6次外，其他均為4次重復(fù)。培養(yǎng)3小時后在100 倍(10X10)顯微鏡下觀察萌發(fā)率，每處理觀察3個視野，以花粉管長度為花粉粒直徑的一倍以上視為萌發(fā)。
▲獼猴桃花粉打包好即將發(fā)運
2 結(jié)果與分析
2.1 不同株系花粉生活力和萌發(fā)力
4個美味獼猴桃雄性株系新鮮花粉的生活力在48.16%~97.06%之間，其中以35 -19N1的生活力最強，萌發(fā)率也最高。經(jīng)方差分析，花粉生活力在4個株系間有極顯著差異，而萌發(fā)率除幫增一號外，在其他株系間無明顯差異。另外，花粉生活力強的株系其萌發(fā)率也高，但萌發(fā)率并不與生活力成正比，即具有生活力不一定就能萌發(fā)(見表l)。
▲獼猴桃花粉萌發(fā)動態(tài)及培養(yǎng)基成分對花粉萌發(fā)的影響
2.2 不同株系花粉萌發(fā)動態(tài)
幫增一號、35-19N1及秦雄201的花粉經(jīng)培養(yǎng)0.5小時，均有萌發(fā)。在0.5~2小時間，幫增一號和35-19N1的花粉萌發(fā)處于迅速上升階段，2小時后基本趨于穩(wěn)定。秦雄 201 花粉在0.5~1.5小時間萌發(fā)較快，其后減緩，2.5小時后又出現(xiàn)迅速上升之勢(見圖 1)。
▲獼猴桃花粉萌發(fā)動態(tài)及培養(yǎng)基成分對花粉萌發(fā)的影響
2.3 培養(yǎng)基成分對花粉萌發(fā)的影響
2.3.1 硼酸 由表2可知，在0~150mg/L范圍內(nèi)，幫增一號花粉萌發(fā)率隨H3BO3濃度增大而遞增，當濃度達200mg/L時萌發(fā)率有所下降，但仍明顯高于對照。
▲獼猴桃花粉萌發(fā)動態(tài)及培養(yǎng)基成分對花粉萌發(fā)的影響
2.3.2 仲鉬酸鈉在0~80mg/L范圍內(nèi)，35-18N1花粉萌發(fā)率隨Na6M07 O24濃度的增加而增高，而花粉管長度與處理濃度間無一定規(guī)律可尋，但均與對照有極顯著差異。20~80mg/L各濃度處理間花粉萌發(fā)率無極顯著差異(見表3)。
▲獼猴桃花粉萌發(fā)動態(tài)及培養(yǎng)基成分對花粉萌發(fā)的影響
2.3.3 硝酸鈣 從表3可以看出，5~10mg/L Ca(NO3)2對于35-18N1獼猴桃花粉萌發(fā)有明顯的促進作用，而對花粉管伸長無影響。當Ca(NO3)2濃度高于 50mg/L時，花粉萌發(fā)和花粉管生長均受到明顯抑制。
2.3.4 硫酸錳在0~100 mg/L 范圍內(nèi)，隨 MnSO4濃度升高,35-18N1花粉萌發(fā)率、花粉管長度均呈增加之勢，且以100mg/L最為理想。當 MnSO4高于150mg/L時，花粉萌發(fā)和花粉管生長受到了一定的抑制(見表3)。此外，濃度過高時，伴隨有花粉管瘦小、大頭及彎曲等現(xiàn)象發(fā)生。
2.4 氯化鈉對花粉萌發(fā)、花粉管伸長的影響
培養(yǎng)基中NaCl濃度在50~500mg/L時，秦雄201及35-19N1花粉的萌發(fā)和花粉管的伸長均受到了影響，并隨NaCl濃度的增大而加劇，同時有畸形花粉管出現(xiàn)。NaCl對花粉萌發(fā)率的影響大于對花粉管伸長的影響。NaCl0~500mg/L范圍內(nèi)，不同株系在同一水平上有差異，同一株系在不同水平上有顯著差異(見表 4)。隨 NaCl 濃度增加，秦雄201 花粉萌發(fā)率下降趨勢弱于35-19N1花粉，秦雄201 花粉的耐鹽性強于35-19N1,因此，秦雄201 雄株是選育耐鹽性獼猴桃的優(yōu)選授粉樹。
▲獼猴桃花粉萌發(fā)動態(tài)及培養(yǎng)基成分對花粉萌發(fā)的影響
3 小結(jié)
供試4個美味獼猴桃雄性株系新鮮花粉生活力在48.16%~97.06%之間，萌發(fā)率在36.23%~51.73%之間?；ǚ凵盍姷闹晗灯涿劝l(fā)率也高，但萌發(fā)率并不與生活力成正比，即具有生活力不一定就具有萌發(fā)力。
在 10%蔗糖、H3BOз150mg/L、1%瓊脂為基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加Ca(NO3 )25mg/L、 Na6M07O24? 80mg/L或MnSO4100mg/L能明顯提高獼猴桃花粉的發(fā)芽率，促進花粉管伸長。另外，基本培養(yǎng)基中H3BO3的濃度以150mg/L為最佳。 在人工培養(yǎng)條件下，幫增一號和35-19N1花粉萌發(fā)在2小時后基本趨于穩(wěn)定。秦雄201花粉在3.5 小時其萌發(fā)率仍處于上升趨勢，這與王郁民等(1991)的觀察結(jié)果有差異，其萌芽率最大值的發(fā)生時間有待進一步研究。
▲testing pollen
NaCl不利于獼猴桃花粉的萌發(fā)和花粉管生長。不同株系花粉的耐鹽性有差異，秦雄201的耐鹽性強于 35-19N1。觀察中還發(fā)現(xiàn)高濃度NaCl不僅不利于花粉萌發(fā)和花粉管生長,而且伴隨有花粉管瘦小、大頭和彎曲等畸形現(xiàn)象。當高濃度MnSO4時也有同樣現(xiàn)象出現(xiàn)。
▲播宏果業(yè)是貴州省最大的獼猴桃種植公司，種植1200畝高山獼猴桃，其中獼猴桃花粉項目是中國單體面積最大的獼猴桃花粉園，豐產(chǎn)期產(chǎn)花粉400公斤，提供高品質(zhì)、高倍體、高活性的獼猴桃花粉。聯(lián)系微信18030405084
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